瓊脂糖凝膠電泳
agarose gel electrophoresis
定義:用瓊脂糖凝膠作支持物的電泳法。借助瓊脂糖凝膠的分子篩作用,核酸片段因其分子量或分子形狀不同,電泳移動(dòng)速度有差異而分離。是基因操作中常用的重要方法。
學(xué)科:生物化學(xué)與分子生物學(xué)_方法與技術(shù)
相關(guān)名詞:瓊脂糖 電泳 遷移速率 溴化乙錠
圖片來源:視覺中國
【延伸閱讀】
瓊脂糖凝膠電泳是以瓊脂糖為支持介質(zhì),利用DNA分子的電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng),實(shí)現(xiàn)分離、鑒定和純化DNA的技術(shù)。DNA分子在pH值高于其等電點(diǎn)的溶液中帶負(fù)電荷,在電場中向正極移動(dòng)。在一定的電場強(qiáng)度下,DNA分子的遷移速率取決于分子篩效應(yīng),即分子大小和構(gòu)象。瓊脂糖凝膠具有網(wǎng)格結(jié)構(gòu),分子量較大的DNA分子泳動(dòng)時(shí)受到的阻力較大,分子量較小的DNA分子受到的阻力較小。因此不同分子量的DNA的遷移速率不同,并且與其相對分子質(zhì)量成反比。另外DNA的分子構(gòu)象也可影響其遷移速率,相同分子量的DNA,超螺旋共價(jià)閉環(huán)質(zhì)粒DNA遷移速度最快,線性DNA其次,開環(huán)DNA最慢。
瓊脂糖凝膠電泳的操作流程包括:配制凝膠、上樣、電泳、觀察結(jié)果。
1.配制凝膠:瓊脂糖凝膠濃度通常在0.5%~2%之間,低濃度瓊脂糖凝膠用來進(jìn)行分子量較大DNA的分析,高濃度瓊脂糖凝膠用來進(jìn)行分子量較小DNA的分析。瓊脂糖凝膠分離DNA的范圍為0.2~20kb,約可區(qū)分相差100bp的DNA片段。
2.上樣:樣品與上樣緩沖液混勻后加入到加樣孔中。上樣緩沖液含有溴酚藍(lán)、蔗糖和甘油,溴酚藍(lán)起到指示樣品遷移過程的作用,蔗糖和甘油可增加樣品密度,使樣品沉入樣品孔底部。
3.電泳:電場強(qiáng)度一般為3~5V/cm(兩電極間距離),在一定范圍內(nèi),低電壓下分離效果較好。
4.觀察結(jié)果:熒光染料溴化乙錠(EB)可以嵌入DNA雙鏈的配對堿基之間,形成EB-DNA絡(luò)合物,在紫外線照射下,發(fā)出紅色熒光。需要注意的是,EB是一種強(qiáng)誘變劑,具有毒性,在操作過程中須加以防護(hù)。實(shí)驗(yàn)人員也可以選取相對安全的核酸染料來替代溴化乙錠。
(延伸閱讀作者:東北師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 張帆博士)
責(zé)任編輯:張鵬輝